MRS培养基的灭菌方法

     高压蒸汽灭菌适合于MRS培养基、耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。     

     MRS培养基、在制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内 完成灭菌工作。灭菌时一般是在1.1kgf/cm2（1kgf/cm2 = 0.098MPa）压力下， 温度121℃时，灭菌15-30分钟即可。

 

     消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。

 

     灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3天，以便观察培养基是否彻底灭菌，这样能够使某些因为没有彻底灭菌的培养基，在接种前被检出，可避免杂菌污染而造成不必要的损失，这点对少而重要的材料尤其值得注意。但是在同等条件下经多次使用无污染后，就没必要再摆3天后才使用，而是冷却凝固后就可使用了。

 

     暂时不用的培养基应置于10℃下保存。特别是含有生长调节物质的培养基，置于4-5℃的低温下保存会更好。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基多也不要超过1个月。多数情况下，应在灭菌后3周内用完。

 

     使用高压灭菌锅要注意一下事项。

     1. 使用前应仔细阅读说明书，严格按要求操作。

     2. 先在高压蒸汽灭菌锅内加水，加水量应按照说明书上要求。

     3. 不可装太满，否则因压力与温度不对应，造成灭菌不彻底。

     4. 记住达到所需压力的时间，通常灭菌要求1.1kgf/cm2,锅内达121℃，按不同灭菌要求维持压力15-40分钟。

     5. 不能随意延长灭菌时间和增加压力。培养基要求比较严格，既要保证灭菌彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，琼脂在长时间灭菌后凝固力也会下降，以致不凝固。

     6. 当冷却被消毒的溶液时，必须高度注意，如果压力急剧下降，超过了温度下降的速率，就会使液体沸腾，从而培养容器中溢出，导致培养基沾污瓶口等造成污染。务必缓慢放出蒸汽，当压力逐渐降至零后，才能打开盖子。